細(xì)胞活力檢測(cè)是細(xì)胞生物學(xué)研究、藥物篩選及臨床細(xì)胞治療中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其結(jié)果準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論與臨床決策。本文聚焦 Nexcelom Bioscience 旗下 CS2-0106-5ML AOPI 染液，從其雙熒光標(biāo)記技術(shù)原理、抗干擾性能優(yōu)化、與自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)平臺(tái)兼容性等核心技術(shù)維度展開分析，結(jié)合腫瘤細(xì)胞藥物敏感性測(cè)試、干細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量監(jiān)控等實(shí)際應(yīng)用案例，驗(yàn)證其在細(xì)胞活力精準(zhǔn)定量、死細(xì)胞 / 活細(xì)胞清晰區(qū)分方面的性能優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，關(guān)聯(lián)科研樣本處理全流程，引入上海易匯生物樣本保存服務(wù)，構(gòu)建 “樣本保存 - 細(xì)胞活力檢測(cè) - 數(shù)據(jù)分析" 的完整技術(shù)支撐體系，為科研人員提供實(shí)踐指導(dǎo)與技術(shù)參考。
關(guān)鍵詞
Nexcelom CS2-0106-5ML、AOPI 染液、細(xì)胞活力檢測(cè)、雙熒光標(biāo)記、樣本保存服務(wù)
一、引言：細(xì)胞活力檢測(cè)的行業(yè)需求與染液技術(shù)痛點(diǎn)
在細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞活力是評(píng)估細(xì)胞生理狀態(tài)、藥物毒性、培養(yǎng)條件適用性的核心指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于腫瘤藥物篩選（如評(píng)估藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效率）、干細(xì)胞擴(kuò)增質(zhì)量控制（如判斷干細(xì)胞分化過程中活力變化）、細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)控（如 CAR-T 細(xì)胞輸注前的活力檢測(cè)）等場(chǎng)景。傳統(tǒng)細(xì)胞活力檢測(cè)方法（如臺(tái)盼藍(lán)染色）存在明顯局限：臺(tái)盼藍(lán)僅能通過細(xì)胞膜完整性區(qū)分細(xì)胞死活，易受細(xì)胞自噬、凋亡早期細(xì)胞膜通透性變化影響，導(dǎo)致假陽性結(jié)果；且手動(dòng)計(jì)數(shù)誤差大，難以滿足高通量、精準(zhǔn)化檢測(cè)需求。
AOPI（吖啶橙 - 碘化丙啶）雙熒光染液憑借 “活細(xì)胞與死細(xì)胞特異性熒光標(biāo)記" 優(yōu)勢(shì)，成為當(dāng)前主流檢測(cè)方案。但市場(chǎng)上多數(shù) AOPI 染液存在兩大技術(shù)痛點(diǎn)：一是熒光穩(wěn)定性差，染色后短時(shí)間內(nèi)熒光淬滅，影響批量樣本檢測(cè)；二是抗干擾能力弱，樣本中的細(xì)胞碎片、血清成分易導(dǎo)致非特異性熒光，干擾計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。Nexcelom Bioscience 研發(fā)的 CS2-0106-5ML AOPI 染液，針對(duì)上述問題進(jìn)行技術(shù)革新，通過優(yōu)化染料配比與緩沖體系，在熒光穩(wěn)定性、抗干擾性及檢測(cè)兼容性方面實(shí)現(xiàn)突破，成為科研與臨床檢測(cè)領(lǐng)域的優(yōu)選試劑。
二、Nexcelom CS2-0106-5ML AOPI 染液的核心技術(shù)創(chuàng)新
（一）雙熒光染料精準(zhǔn)配比：實(shí)現(xiàn)活 / 死細(xì)胞清晰區(qū)分
CS2-0106-5ML AOPI 染液的核心技術(shù)在于吖啶橙（AO）與碘化丙啶（PI）的精準(zhǔn)配比（摩爾比 1:1.2）及純度優(yōu)化。AO 作為活細(xì)胞染料，可穿透完整細(xì)胞膜，與細(xì)胞內(nèi) DNA 結(jié)合發(fā)出綠色熒光（激發(fā)波長(zhǎng) 488nm，發(fā)射波長(zhǎng) 530nm），與 RNA 結(jié)合發(fā)出橙色熒光；PI 作為死細(xì)胞染料，僅能穿透破損細(xì)胞膜，與 DNA 結(jié)合發(fā)出紅色熒光（激發(fā)波長(zhǎng) 535nm，發(fā)射波長(zhǎng) 617nm）。
Nexcelom 對(duì) AO 與 PI 進(jìn)行高純度提純（純度均達(dá) 99.5% 以上），去除染料中的雜質(zhì)熒光分子，避免非特異性熒光干擾。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，使用該染液染色后，活細(xì)胞綠色熒光信號(hào)強(qiáng)度（相對(duì)熒光單位 RFU）達(dá) 850-1200，死細(xì)胞紅色熒光 RFU 達(dá) 900-1300，兩者熒光峰分離度達(dá) 180nm 以上，無熒光重疊區(qū)域，可通過流式細(xì)胞儀或自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)儀實(shí)現(xiàn)活 / 死細(xì)胞的精準(zhǔn)區(qū)分，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確率較傳統(tǒng) AOPI 染液提升 15%-20%。
（二）熒光穩(wěn)定劑添加：延長(zhǎng)熒光有效檢測(cè)窗口
針對(duì)傳統(tǒng) AOPI 染液熒光淬滅快的問題，CS2-0106-5ML 染液中添加了專用熒光穩(wěn)定劑（2 - 羥基 - 1 - 萘甲醛腙衍生物）。該穩(wěn)定劑可通過與染料分子形成氫鍵，抑制染料的光氧化反應(yīng)，延緩熒光淬滅速度。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，在室溫（25℃）、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室光照條件下，染色后的細(xì)胞樣本在 60 分鐘內(nèi)熒光強(qiáng)度衰減率僅為 8%-12%，而市場(chǎng)同類產(chǎn)品衰減率達(dá) 30%-40%；若在 4℃避光條件下，熒光有效檢測(cè)窗口可延長(zhǎng)至 120 分鐘，批量樣本（如 96 孔板樣本）的連續(xù)檢測(cè)需求，避免因熒光淬滅導(dǎo)致的重復(fù)染色與數(shù)據(jù)偏差。
（三）抗干擾緩沖體系：適配復(fù)雜樣本檢測(cè)
科研樣本常含有細(xì)胞碎片、血清蛋白、抗生素等雜質(zhì)，易與染料結(jié)合產(chǎn)生非特異性熒光，干擾檢測(cè)結(jié)果。CS2-0106-5ML 染液的緩沖體系（含 20mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、0.02% 吐溫 - 20，pH 7.4）具有三大抗干擾功能：一是 Tris-HCl 緩沖對(duì)可穩(wěn)定樣本 pH 值，避免 pH 波動(dòng)導(dǎo)致的染料結(jié)合效率變化；二是 NaCl 維持滲透壓平衡，防止細(xì)胞因滲透壓變化導(dǎo)致的細(xì)胞膜破損（假陽性死細(xì)胞）；三是吐溫 - 20 作為非離子表面活性劑，可減少血清蛋白與染料的非特異性結(jié)合，降低背景熒光強(qiáng)度（背景 RFU 控制在 50-80，遠(yuǎn)低于同類產(chǎn)品的 120-180）。
針對(duì)含大量細(xì)胞碎片的樣本（如腫瘤細(xì)胞消化后的懸液），該染液還能通過 “碎片熒光屏蔽" 作用，使細(xì)胞碎片的非特異性熒光 RFU 低于 100，與活細(xì)胞綠色熒光（RFU 850+）形成顯著差異，自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可通過熒光強(qiáng)度閾值輕松排除碎片干擾，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確率達(dá) 92% 以上。
（四）與自動(dòng)化平臺(tái)高度兼容：滿足高通量檢測(cè)需求
CS2-0106-5ML AOPI 染液專為 Nexcelom 自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（如 Cellometer K2、Auto T4）設(shè)計(jì)，同時(shí)兼容主流流式細(xì)胞儀（如 BD FACSCanto II）與高通量成像系統(tǒng)（如 ImageXpress Micro）。染液的粘度（25℃時(shí) 1.2-1.5 mPa?s）與表面張力（32-35 mN/m）經(jīng)過優(yōu)化，可快速與細(xì)胞懸液混合均勻（混合時(shí)間＜30 秒），且不會(huì)在檢測(cè)芯片或流式細(xì)胞儀進(jìn)樣管內(nèi)產(chǎn)生氣泡，確保檢測(cè)流程順暢。
在 96 孔板高通量檢測(cè)中，該染液與 Cellometer Auto T4 配合使用，可實(shí)現(xiàn)每小時(shí) 384 個(gè)樣本的檢測(cè)速度，每個(gè)樣本檢測(cè)時(shí)間僅 90 秒，且批內(nèi)變異系數(shù)（CV）＜5%，批間 CV＜8%，滿足藥物篩選等高通量實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)化、高效化需求。
三、Nexcelom CS2-0106-5ML AOPI 染液的典型應(yīng)用案例
（一）腫瘤細(xì)胞藥物敏感性測(cè)試
某科研團(tuán)隊(duì)開展肺癌細(xì)胞（A549 細(xì)胞系）對(duì)紫杉醇類藥物（多西他賽）的敏感性研究，采用 CS2-0106-5ML AOPI 染液結(jié)合 Cellometer K2 計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)步驟如下：將 A549 細(xì)胞接種于 24 孔板（5×10? 細(xì)胞 / 孔），分別加入 0、1、5、10、20 nmol/L 多西他賽，培養(yǎng) 48 小時(shí)后，收集細(xì)胞懸液，按 1:1 體積比加入染液（終濃度 AO 5μg/mL、PI 6μg/mL），染色 5 分鐘后進(jìn)行檢測(cè)。
結(jié)果顯示，隨著多西他賽濃度升高，A549 細(xì)胞活力呈劑量依賴性下降：0 nmol/L 組細(xì)胞活力為 96.2%±2.1%，20 nmol/L 組活力降至 28.5%±3.4%，半數(shù)抑制濃度（IC50）為 7.8 nmol/L。通過熒光成像可清晰觀察到，低濃度藥物組以綠色熒光活細(xì)胞為主，高濃度組紅色熒光死細(xì)胞顯著增多，且無細(xì)胞碎片干擾。該結(jié)果與 CCK-8 法檢測(cè)結(jié)果（IC50 8.1 nmol/L）一致性達(dá) 96.3%，證明該染液在藥物毒性評(píng)估中具有高準(zhǔn)確性與可靠性。
（二）間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量監(jiān)控
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）在細(xì)胞治療中需嚴(yán)格監(jiān)控培養(yǎng)過程中的活力變化，避免活力不足影響治療效果。某干細(xì)胞研究中心采用 CS2-0106-5ML AOPI 染液，對(duì) MSC 傳代培養(yǎng)過程（P3-P8 代）的活力進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。培養(yǎng)過程中，每周收集細(xì)胞樣本，使用染液染色后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)：P3 代 MSC 活力為 97.5%±1.8%，P8 代活力為 92.3%±2.5%，均保持在臨床應(yīng)用要求的 90% 以上；且在傳代過程中，通過熒光信號(hào)可觀察到 MSC 未出現(xiàn)明顯凋亡（無早期凋亡細(xì)胞的橙色熒光信號(hào)），證明培養(yǎng)體系穩(wěn)定。
對(duì)比使用傳統(tǒng)臺(tái)盼藍(lán)染色的手動(dòng)計(jì)數(shù)結(jié)果，AOPI 染液檢測(cè)的 MSC 活力值更穩(wěn)定（臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù) CV 為 12%-15%，AOPI 染液 CV 為 4%-6%），且能提前發(fā)現(xiàn)早期凋亡細(xì)胞（臺(tái)盼藍(lán)無法識(shí)別），為干細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化提供了更精準(zhǔn)的依據(jù)。
四、科研樣本處理全流程支持：融入上海易匯生物樣本保存服務(wù)
細(xì)胞活力檢測(cè)的準(zhǔn)確性始于高質(zhì)量的樣本保存 —— 科研中常需將細(xì)胞樣本從培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)輸至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室（如多中心合作項(xiàng)目），若保存不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力下降、細(xì)胞膜破損，影響檢測(cè)結(jié)果真實(shí)性。在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物針對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本存儲(chǔ)需求，同步提供樣本保存試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長(zhǎng)期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營(yíng)團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。
例如，某多中心腫瘤藥物篩選項(xiàng)目需從 8 家科研機(jī)構(gòu)收集 A549 細(xì)胞樣本，統(tǒng)一送至核心實(shí)驗(yàn)室使用 CS2-0106-5ML AOPI 染液檢測(cè)藥物敏感性。該項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)采用上海易匯生物的定制化細(xì)胞保存試劑（含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基，添加細(xì)胞活力保護(hù)劑），通過期貨服務(wù)提前 45 天鎖定 200 份試劑產(chǎn)能，確保各機(jī)構(gòu)在樣本收集時(shí)能及時(shí)獲取保存試劑；對(duì)于部分緊急樣本（如藥物處理后需立即運(yùn)輸?shù)募?xì)胞），通過現(xiàn)貨服務(wù)實(shí)現(xiàn)次日送達(dá)，避免細(xì)胞在運(yùn)輸過程中活力下降。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用該保存試劑的細(xì)胞樣本，在 4℃條件下運(yùn)輸 24 小時(shí)后，活力下降率僅為 3%-5%，遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)保存方法（活力下降率 15%-20%）；結(jié)合 CS2-0106-5ML AOPI 染液的精準(zhǔn)檢測(cè)，各中心樣本的藥物 IC50 檢測(cè)結(jié)果變異系數(shù)僅為 7.2%，確保了多中心數(shù)據(jù)的一致性，充分體現(xiàn)了 “樣本保存 - 活力檢測(cè)" 協(xié)同配合的重要性。
五、Nexcelom CS2-0106-5ML AOPI 染液的行業(yè)價(jià)值與未來展望
CS2-0106-5ML AOPI 染液的技術(shù)創(chuàng)新，不僅解決了傳統(tǒng)細(xì)胞活力檢測(cè)的精準(zhǔn)度與效率問題，還推動(dòng)了細(xì)胞檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程 —— 其與 Nexcelom 自動(dòng)化平臺(tái)的 “試劑 - 儀器" 一體化解決方案，可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)流程的自動(dòng)化、數(shù)字化，減少人為操作誤差，為多中心研究、高通量篩選提供了標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)支撐。在臨床領(lǐng)域，該染液已被應(yīng)用于 CAR-T 細(xì)胞治療的質(zhì)控環(huán)節(jié)，通過精準(zhǔn)檢測(cè)輸注前 CAR-T 細(xì)胞活力（要求≥80%），為臨床治療安全性提供保障。
未來，Nexcelom Bioscience 將進(jìn)一步優(yōu)化染液性能：一是開發(fā) “長(zhǎng)效熒光型" AOPI 染液，將熒光有效檢測(cè)窗口延長(zhǎng)至 3 小時(shí)以上，滿足超大規(guī)模樣本檢測(cè)需求；二是針對(duì)特殊細(xì)胞類型（如神經(jīng)細(xì)胞、懸浮腫瘤細(xì)胞）開發(fā)專用 AOPI 染液，優(yōu)化染料對(duì)特殊細(xì)胞膜的穿透性與結(jié)合效率；三是結(jié)合人工智能技術(shù)，開發(fā) “染液 - 檢測(cè) - 數(shù)據(jù)分析" 一體化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞活力數(shù)據(jù)的自動(dòng)分析與報(bào)告生成。
上海易匯生物等樣本服務(wù)廠商的深度合作，也將進(jìn)一步完善 “樣本采集 - 保存 - 檢測(cè) - 分析" 的全鏈條支持，為科研與臨床檢測(cè)提供更高效、更穩(wěn)定的技術(shù)保障，推動(dòng)細(xì)胞生物學(xué)研究與精準(zhǔn)醫(yī)療的快速發(fā)展。
六、結(jié)論
Nexcelom CS2-0106-5ML AOPI 染液憑借雙熒光精準(zhǔn)配比、熒光穩(wěn)定劑添加、抗干擾緩沖體系及自動(dòng)化平臺(tái)兼容性的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，在細(xì)胞活力檢測(cè)中實(shí)現(xiàn)了 “精準(zhǔn)區(qū)分、穩(wěn)定檢測(cè)、高效兼容" 的突破，為腫瘤藥物篩選、干細(xì)胞質(zhì)控等場(chǎng)景提供了可靠工具。上海易匯生物樣本保存服務(wù)的融入，進(jìn)一步解決了科研樣本處理的流程痛點(diǎn)，構(gòu)建了完整的技術(shù)支持體系。未來，隨著該染液在技術(shù)上的持續(xù)迭代與行業(yè)應(yīng)用的深化，必將為細(xì)胞生物學(xué)研究與臨床檢測(cè)注入新動(dòng)力，推動(dòng)精準(zhǔn)化、標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞檢測(cè)的普及。
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